Лаборатория преодоления микробной резистентности

Направления исследований

Резистентность микроорганизмов к антимикробным препаратам – антибиотикам, антисептикам, дезинфицирующим средствам, – является общегосударственной проблемой, требующей внимания и принятия мер по ее решению. Резистентность микроорганизмов – возбудителей инфекций, в т. ч. инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП), снижает эффективность лечения больных и способствует распространению возбудителей во внешней среде через объекты – факторы передачи инфекций (воздух, поверхности в помещениях, приборы, аппараты, медицинские изделия и др.), что приводит к росту заболеваемости и повышению смертности.

В течение последних 5 лет в лаборатории собрана коллекция возбудителей ИСМП, проявляющих сочетанную устойчивость к антибиотикам и дезинфицирующим средствам. Это явление слабо изучено в мире, и на фоне наблюдаемого бесконтрольного использования антибиотиков и дезинфицирующих средств ожидается рост таких штаммов, что требует комплексного исследования этого феномена с реализацией системного подхода, в том числе методами молекулярного анализа.

Распространенность и значимость проблемы возросла в период пандемии COVID-19.

В связи с изложенным, основными направлениями деятельности лаборатории являются следующие:

1. Комплексное системное изучение резистентности микроорганизмов – возбудителей ИСМП, микробиологическими и молекулярно-генетическими методами. С этой целью в медицинских организациях проводится выделение микроорганизмов из патологических локусов и с объектов внешней среды, их идентификация, изучение чувствительности к антибиотикам, антисептикам и дезинфицирующим средствам; изучение механизмов формирования резистентности, научное обоснование принципов выбора и ротации дезинфицирующих средств.
2. Изучение устойчивости к биоцидам микроорганизмов в составе биопленки.
3. Совершенствование и разработка новых микробиологических и молекулярно-генетических методов изучения резистентности микроорганизмов.
4. Оказание научно-методической помощи медицинским организациям по вопросам мониторинга чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам, в т.ч. обучение специалистов методам оценки резистентности микроорганизмов к биоцидам на рабочем месте.
5. Поиск путей преодоления резистентности:

• изучение эффективности альтернативных методов дезинфекции, в частности биологического метода – с помощью бактериофагов и пробиотиков;
• сравнительное изучение воздействия различных физических факторов и комбинированного воздействия химических и физических факторов;
• поиск и изучение новых субстанций, эффективных в отношении резистентных видов микроорганизмов.

Методы, применяемые в лаборатории

• При проведении исследований используются микробиологические методы (культуральные, биохимические, микроскопические – световая, конфокальная микроскопия) на тест-культурах грамотрицательных и грамположительных бактерий, микобактерий, грибов родов Candida и Aspergillus, а также молекулярно-генетические методы (ПЦР-РТ, ПЦР-ПДРФ, получение рекомбинантной ДНК, секвенирование – NGS, Сэнгер, гель-электрофорез).
• Оценка резистентности к биоцидам осуществляется в соответствии с МУ 3.5.1.3439-17 «Оценка чувствительности к дезинфицирующим средствам микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях»; методикой, рекомендованной патентом № 2650760; суспензионным и микрометодом на выделенных в медицинских организациях госпитальных изолятах и штаммах микроорганизмов. Идентификация и оценка устойчивости микроорганизмов к антибиотикам проводится также на автоматическом анализаторе Vitek.
• Культивирование биопленок бактерий осуществляется статическим методом в 96-ти луночных плоскодонных полистироловых планшетах. Биомассу биопленки оценивают по уровню экстракции этанолом красителя, который измеряют на микропланшетном ридере (ТЕCAN DESKTOP-4A7U9AL\Infinite M Plex) при длине волны 580 нм в единицах оптической плотности (ОD).
• Специалисты лаборатории владеют всеми методами оценки эффективности биоцидов в отношении бактерий, грибов, спор бацилл и могут провести научные исследования средств любого назначения для обеззараживания объектов внешней среды.

Публикации, методические рекомендации и патенты

Ковальчук СН, Федорова ЛС, Ильина ЕН. Молекулярные механизмы микробной устойчивости к дезинфицирующим средствам. Антибиотики и химиотерапия 2023, 68 (1-2): 45-56. doi.org/10.37489/0235-2990-2023-68-1-2-45-56.

«Проведение дезинфекционных мероприятий в медицинских организациях различного профиля» Практическое руководство М.2020;

Шестопалов Н.В., Федорова Л.С., Скопин А.Ю. «Антимикробная активность и МЭК химических соединений, входящих в состав дезинфицирующих средств» Гигиена и санитария -2019. №10 т.98, стр.1031-1036.

Бакланова О.В., Гололобова Т.В., Федорова Л.С., Лопатина О.В., Бидевкина М.В. и др. «Токсикологическая характеристика и бактерицидные свойства гетерополикислот Кеггина» Гигиена и cанитария - 2022-т.101-№1 С. 88-94

Руководство «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности М.2020. 4.2.3676-20

Шестопалов Н.В., Фёдорова Л.С., Серов А.А. Научно-методическое обоснование ротации дезинфицирующих средств в медицинских организациях на основе оценки чувствительности к ним госпитальных штаммов микроорганизмов // Дез. дело – 2017. – № 4[102]. – С. 28-33.

Шестопалов Н.В., Фёдорова Л.С., Серов А.А., Гололобова Т.В., Рулёва А.И., Сорокина Л.А. Проблемы мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в медицинских организациях // Дез. дело – 2018. – № 2[104]. – С. 14-22.

Фёдорова Л.С., Серов А.А. Совершенствование мониторинга устойчивости госпитальной микрофлоры к дезинфицирующим средствам и анализ его результатов в медицинских организациях г. Москвы // Пест-менеджмент (РЭТ-инфо). – 2019. – № 1(109). – С. 44-45.

Серов А.А., Шестопалов Н.В., Гололобова Т.В., Фёдорова Л.С., Храпунова И.А., Меркульева А.Д. Роль дезинфектологических исследований в организации комплекса профилактических мероприятий // Гигиена и санитария – 2020. – Т. 99, № 3. – С. 235-241.

Проведение дезинфекционных мероприятий в медицинских организациях различного профиля. Практическое руководство – М.: ФБУН НИИДезинфектологии Роспотребнадзора, 2020. – 132 с. (авторы: Шестопалов Н.В., Храпунова И.А., Пантелеева Л.Г., Гололобова Т.В., Федорова Л.С., Скопин А.Ю., Шестопалова Т.Н., Серов А.А., Матвеева Е.А. и др.) и другие.

Ильякова А.В., Шестопалов Н.В., Федорова Л.С., Белова А.С, Возможность использования спорообразующих бактерий рода Bacillus в производстве дезинфектантов // Гигиена и санитария, 2020; 99 (5): DOI: - https://doi.org/10.33029/0016-9900-2020-99-5-436-442

Шестопалов Н.В., Федорова Л.С., Ильякова А.В., Белова А.С. Моющие средства на основе пробиотиков: эффективность и безопасность использования (обзор), Дез. дело №3 (113) 2020 г.

Патенты по дезинфицирующим средствам и методам их исследований: 

Получен 21 патент, в т.ч. патент №2650760 «Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам»

Нормативные документы по вопросам резистентности микроорганизмов, разработанные с участием сотрудников лаборатории

Методические указания МУ 3.5.1.3439-17 «Оценка чувствительности к дезинфицирующим средствам микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организациях.

Методические рекомендации МР 4.2.0161-19 «Методы индикации биологических пленок на абиотических объектах.

ГОСТ Р 56990-2016 «Химические дезинфицирующие средства. Критерии и показатели эффективности».

ГОСТ Р 58151.4-2018 «Дезинфицирующие средства. Методы определения показателей эффективности». 2018 г.

ГОСТ «Дезинфицирующие средства. Суспензионный метод». 2020 г.